產品介紹

lip2000高效DNA TR是一種新型的陽離子脂質體轉染試劑適合于將核酸DNA轉染入真核細胞，具有低細胞毒性；對多種類型的細胞和培養板都具有高轉染效率；轉染時血清的存在不影響轉染效率的優點。

lip2000高效DNA TR轉染試劑對于常見的哺乳動物細胞具有非常高的轉染效率、重復性好、操作簡單、無明顯的細胞毒性，并且對于貼壁細胞和懸浮細胞都適用。

lip2000高效DNA TR主要適用于DNA 等單一成分的細胞轉染。

lip2000高效DNA TR轉染過表達質粒后，通常 24-48 h 后達到較高的蛋白表達水平，并且很多情況下蛋白表達量在轉染后 48 h 顯著高于轉染后 24 h；

lip2000高效DNA TR轉染細胞時，基本不受細胞培養液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進行細胞轉染。但為了取得最佳的轉染效果，推薦轉染時使用

不含抗生素培養液。轉染后不必去除轉染液，或者改變或添加培養基，但轉染 4-6 h 后可去除轉染液。

使用方法

DNA 轉染

對大多數細胞來說， DNA(μg)與lip2000高效DNA TR (μl) 的比例為1:2~1:3。轉染時高的細胞密度可以得到高的轉染效率和表達水平，并能減少細胞毒性。

1. 以24孔板為例

貼壁細胞：轉染前一天，用500μl不含抗生素的培養基接種0.5～2×105細胞，使之第二天能達到80-90%融合。

懸浮細胞：在準備DNA-TRLIP2000DNA復合物之前，用500μl不含抗生素的培養基接種4～8×105細胞即可。

2. 對每個轉染樣品，進行以下操作

a.在eppendorf管里分別加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium和0.8μgDNA輕柔混勻（不能渦旋或離心），制成DNA稀釋液。

b.在另一個eppendorf管里分別加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium和2.0μllip2000高效DNATR(注意用前先混勻)，輕柔混勻，制成lip2000高效DNATR稀釋液，室溫靜置5分鐘。

c.將DNA稀釋液和lip2000高效DNATR稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘，形成DNA-lip2000高效DNATR復合物。DNA-lip2000高效DNATR復合物在室溫下可穩定存在6小時。

3. 將DNA-lip2000高效DNATR復合物加入到接種好的細胞中，將培養板輕輕地前后搖動，使復合物分散均勻。

4. 在37℃CO2培養箱中培養4-6小時后更換培養基,繼續培養18～48小時。

5. 如果要篩選穩定細胞株，則在轉染24小時后將細胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養基中，第二天加入選擇性培養基進行篩選。

優化 DNA 轉染

質粒DNA轉染的優化為達到最高的轉染效率和降低細胞毒性的影響，可以對DNA和lip2000高效DNA TR的比例以及細胞密度進行優化，一般在1:0.5~1:5的范圍內優化DNA (μg)和lip2000高效DNA TR (μl) 的比例。

1. 使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉染效率。

2. 轉染前細胞必須處于良好的生長狀態。

3. 需自備不含抗生素的無血清培養液或 Opti-MEM?培養液或普通的 DMEM 培養液。

4. lip2000高效DNA TR轉染試劑不能vortex 或離心，宜緩慢晃動混勻。

5. 轉染試劑使用后請立即蓋好蓋子，避免長時間暴露空氣中。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。